组蛋白泛素化（Histone ubiquitination）是表观遗传学调控中的关键修饰，它通过调节染色质结构影响基因表达、DNA损伤修复及肿瘤发生发展。在癌症研究中，组蛋白泛素化的异常常与肿瘤进展、耐药和免疫微环境相关，因此精准分析其状态对靶点发现和临床转化具有重要意义。

一、组蛋白泛素化的基本原理

泛素化是通过泛素（Ub）共价连接到目标蛋白赖氨酸（K）残基上的过程。对于组蛋白而言，常见的泛素化修饰位点包括：

• H2A-K119ub1：通常与基因沉默相关。
• H2B-K120ub1：与转录激活和DNA修复相关。

泛素化修饰复杂，包括单泛素化（monoubiquitination）和多聚泛素链（polyubiquitination），且其动态变化受泛素连接酶（E3 ligase）、去泛素化酶（DUBs）调控。在癌症细胞中，这种修饰的异常往往反映基因调控网络的紊乱。

二、癌症样本组蛋白泛素化的实验策略

分析癌症样本中的组蛋白泛素化通常有两条路线：免疫学方法和质谱组学方法。

1、免疫学检测

（1）Western blot：使用针对特定泛素化位点的抗体，可定量不同样本组蛋白泛素化水平。

• 优点：简单、低成本。
• 缺点：只能检测已知修饰位点，难以覆盖全组蛋白泛素化谱。

（2）免疫沉淀（IP）：通过泛素抗体或组蛋白特异抗体富集修饰蛋白，再用WB或质谱分析。

• 优点：提高信噪比，能捕获低丰度修饰。
• 注意：抗体特异性至关重要，避免交叉反应。

2、质谱组学（MS）分析

质谱是高通量、精准的组蛋白修饰分析工具，尤其适合癌症样本中复杂的泛素化谱研究。常用策略包括：

（1）样本准备

组蛋白提取

• 常用酸提取法（0.4 N H2SO4）从核中富集组蛋白。
• 可保留各种修饰，同时去除非组蛋白污染。

蛋白酶解

• 通常使用胰蛋白酶（Trypsin）或Lys-C。
• 注意泛素化残基会留下特征性的GlyGly（GG）残基，MS可通过这个标记识别泛素化位点。

（2）富集策略

• 免疫亲和富集：使用抗-GlyGly抗体富集泛素化肽段。
• 化学方法：利用泛素特异化学标签（如TUBE）捕获泛素化蛋白。
• 富集后的肽段能显著提高低丰度组蛋白泛素化的检测灵敏度。

（3）质谱分析

• LC-MS/MS（液相色谱-串联质谱）是核心。
• 推荐高分辨率仪器（如Orbitrap系列）以确保肽段鉴定的准确性。
• 数据分析需使用GlyGly修饰搜索参数，软件如MaxQuant或Proteome Discoverer。

3、数据分析与可视化

（1）定量分析

可采用Label-free或TMT标记法，比较癌症组织与正常组织的组蛋白泛素化水平。

（2）位点特异性分析

识别关键泛素化位点（如H2A-K119ub1上调）。

（3）生物信息学整合

与转录组、甲基化、蛋白质互作网络结合，解析泛素化在肿瘤中的功能意义。

三、组蛋白泛素化研究的应用前景

组蛋白泛素化研究不仅揭示了染色质调控的基本机制，还为理解肿瘤发生、基因表达异常和DNA修复提供了重要线索。通过定量分析不同组织或细胞状态下的泛素化谱，可以识别关键调控位点，解析泛素化修饰与表观遗传网络、转录调控及信号通路的关系。此外，泛素化的动态变化也为筛选潜在药物靶点和评价治疗干预效果提供了新的策略。现代质谱技术与高特异性抗体富集方法相结合，使低丰度组蛋白泛素化的检测成为可能，为科研和临床转化奠定了坚实基础。

癌症样本中组蛋白泛素化的分析结合免疫学检测和质谱组学，不仅可以精准定位修饰位点、定量低丰度修饰，还能揭示其在染色质调控、基因表达和信号通路中的功能意义。通过高灵敏度质谱平台、特异化抗体富集策略和生物信息学整合分析，科研人员能够全面解析组蛋白泛素化谱，为癌症机制研究、潜在药物靶点发现以及临床转化提供可靠数据和科学依据。这一技术路线正是百泰派克生物科技在表观遗传组学研究领域提供的专业解决方案，助力科研人员从基础发现到应用转化的全流程创新。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

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北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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